小鼠巨噬細(xì)胞培養(yǎng)方法

小鼠巨噬細(xì)胞培養(yǎng)方法
　　巨噬細(xì)胞(小鼠巨噬細(xì)胞)也建有無(wú)限細(xì)胞系，大多來(lái)自小鼠，如P338D1、S774A.1、RAW264.7等，均獲惡性，培養(yǎng)中呈巨噬細(xì)胞形態(tài)和吞噬功能，易于傳代和瓶壁分離，但難以建株。培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可用各樣方法和各種來(lái)源來(lái)獲取細(xì)胞，以小鼠腹腔取材法*為實(shí)用，其法如下：

　　1、(小鼠巨噬細(xì)胞)實(shí)驗(yàn)前三天，向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無(wú)菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內(nèi)）。

　　2、引頸殺死動(dòng)物，手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3～5秒。

　　3、置動(dòng)物于解剖臺(tái)上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開(kāi)皮膚拉向兩側(cè)，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁。

　　4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同時(shí)從兩側(cè)用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內(nèi)充分流動(dòng)。

　　5、用針頭輕輕挑起腹壁，使動(dòng)物體微傾向一側(cè)，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)。

　　6、小心拔出針頭，把液體注入離心管中，250g4℃離心10分鐘，去上清，加10mlEagle培養(yǎng)基。

　　7、計(jì)數(shù)細(xì)胞，每只小鼠可產(chǎn)生20～30×105細(xì)胞，其中90%為巨噬細(xì)胞。

　　8、為獲取3×105帖附細(xì)胞/平方厘米，需接種2.5×106/ml。

　　9、為純化培養(yǎng)細(xì)胞，去除其它白細(xì)胞，接種數(shù)小時(shí)后，去除培養(yǎng)液，用Eagle液沖洗1～2次后，再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃，5%CO2溫箱中培養(yǎng)。

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